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人外周血循環(huán)腫瘤細(xì)胞(CTC)檢測技術(shù)在臨床腫瘤診斷和治療中的作用
有關(guān)循環(huán)腫瘤細(xì)胞的理論已有很長時間.腫瘤轉(zhuǎn)移及復(fù)發(fā)的過程均是一個循環(huán)腫瘤細(xì)胞定植生長的級連放大的瀑布反應(yīng).目前腫瘤的發(fā)現(xiàn)和診斷仍高度依賴于影像學(xué)及腫瘤特異性血清標(biāo)志物的方法,不能及時發(fā)現(xiàn)腫瘤的轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā).基于腫瘤細(xì)胞播散理論,檢測循環(huán)腫瘤細(xì)胞可更早期有效發(fā)現(xiàn)腫瘤的早期轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā).本文對文獻(xiàn)報道的檢測循環(huán)腫瘤細(xì)胞在臨床腫瘤診斷和治療中的作用進(jìn)行了總結(jié),并與目前經(jīng)典的標(biāo)志物和影像學(xué)進(jìn)行了比較.
什么是CTC？
CTC指自發(fā)或因診療操作進(jìn)入外周血循環(huán)的腫瘤細(xì)胞。腫瘤病人，隨著腫瘤在病人體內(nèi)的不斷生長，部分腫瘤細(xì)胞會因多種機(jī)制脫離腫瘤母體而進(jìn)入血液循環(huán)。這些細(xì)胞可能在短期內(nèi)死亡，也可能造成遠(yuǎn)處臟器的轉(zhuǎn)移。
肺癌患者檢查CTC的意義？
目前對腫瘤的臨床診斷方法多局限于影像學(xué)檢查，如胸片、CT或B超等，醫(yī)生只有在影像上發(fā)現(xiàn)有新生物才會考慮存在腫瘤，而已確診為肺癌的病人，醫(yī)生也只能通過影像學(xué)檢查，觀察是否有其他部位的腫瘤或已發(fā)現(xiàn)腫瘤體積是否發(fā)生改變，以此來推斷腫瘤是治愈還是在進(jìn)展。而影像學(xué)表現(xiàn)出來的結(jié)果往往已經(jīng)是即存事實(shí)，病人多已錯過了最佳的治療時期或已接受了過度的治療。
CTC的最大優(yōu)點(diǎn)就是及時反映了病人所患腫瘤的狀態(tài)，其早于影像學(xué)表現(xiàn)，醫(yī)生可通過CTC結(jié)果預(yù)知患者的預(yù)后、是否應(yīng)改變治療方案、治療效果及病人是否復(fù)發(fā)等。
臨床上CTC可以指導(dǎo)治療方案嗎？
當(dāng)然可以，目前我院胸外科根據(jù)病人術(shù)、前術(shù)后CTC的變化以及化療前、后CTC的變化及時判定治療效果和治療方法的敏感性，較影像學(xué)改變更快捷地及時調(diào)整治療方案。一些病人在外院診斷晚期，不能手術(shù)治療，但經(jīng)我院CTC檢測證實(shí)腫瘤無轉(zhuǎn)移傾向，可以手術(shù)治療，目前這些病人手術(shù)后均恢復(fù)順利，并未發(fā)現(xiàn)腫瘤晚期的表現(xiàn)；以往我們認(rèn)為手術(shù)可能已徹底切除的腫瘤，術(shù)后無化療計劃，但經(jīng)CTC檢測可能發(fā)現(xiàn)患者有腫瘤轉(zhuǎn)移傾向，即刻召回病人化療；對化療中的病人，以往經(jīng)驗可能認(rèn)為化療有效，但CTC檢測證實(shí)腫瘤仍在活動，結(jié)合化療藥敏檢查等，即刻改變化療方案。
總之，CTC這一高新技術(shù)剛在我院（也即我國）開展，其真實(shí)的臨床意義尚在探索中，就我們目前所能了解的結(jié)果，認(rèn)為：基于我科全面的手術(shù)技術(shù)、CTC檢測、化療藥敏等的個體化治療（而非以往的統(tǒng)計學(xué)概率治療）對于病人及時選擇有效治療、判定預(yù)后有難以估量的臨床價值。
美國腫瘤協(xié)會于2006 年發(fā)表的年度報告指出，目前全世界范圍內(nèi)每3 人中就有1 人在其一生中會患有某種腫瘤，而且腫瘤發(fā)病率在發(fā)展中國家隨著污染程度的增加，患病幾率還會高于1/3 的比例。現(xiàn)今全世界用于腫瘤治療與防治的費(fèi)用每年以16.5% 的比例遞增。僅用于乳腺癌，結(jié)直腸癌及前列腺癌（還不包括發(fā)病率最高的肺癌）的投資，目前世界范圍內(nèi)已達(dá)每年92 億美元。
目前全世界用于腫瘤診斷的方法可歸為三大類：病理學(xué)（活檢切片）；影像學(xué)（超聲，X光，CT, PET 等）和血清學(xué)（血清腫瘤相關(guān)蛋白，如CA-125, CA-199, CEA 等），但所有這些方法都有不可避免的缺點(diǎn)，例如靈敏性及特異性差，過于依賴醫(yī)生判斷的主觀性等。因此目前臨床急需一種能夠為醫(yī)生及病人提供準(zhǔn)確，快速的腫瘤檢測手段。經(jīng)過長時間的大量研究，美國FDA 認(rèn)證的人外周血循環(huán)腫瘤細(xì)胞（Circulating Tumor Cell, CTC）檢測目前已被公認(rèn)為最好及最可觀的檢測手段之一。
目前已有越來越多的國內(nèi)外醫(yī)生開始應(yīng)用此技術(shù)作為腫瘤檢查的重要輔助手段。不僅于此，CTC 檢測也被公認(rèn)為是目前國外新近流行的腫瘤治療方法-即阻斷腫瘤細(xì)胞入血轉(zhuǎn)移的唯一有效檢測指標(biāo)。除了上述CTC可作為腫瘤檢測手段外，CTC還可成功應(yīng)用于以下一系列其它方面的用途：(1)個體化治療的體外腫瘤藥物篩選；(2)體內(nèi)化療藥物藥效的快速評估: 相對于每12周一查的CT診斷，CTC在第1-2周即可顯示藥效結(jié)果，這一點(diǎn)對臨床醫(yī)生和病人尤為重要；(3) 根據(jù)CTC數(shù)目，判斷病人愈后狀況及存活時間；（4）腫瘤病人復(fù)發(fā)的監(jiān)測與及時診斷；及（5）正常人群體檢普查以利于盡可能的腫瘤早期診斷。除了應(yīng)用于臨床外，CTC 亦可應(yīng)用于眾多藥廠和科研機(jī)構(gòu)的基礎(chǔ)研究，包括尋找新的腫瘤標(biāo)識物以及開發(fā)新的抗腫瘤藥物等。
目前美國FDA已于2004年認(rèn)證了美國上市公司Immunicon/Veridex的CTC檢測技術(shù)及其臨床應(yīng)用。該公司的銷售額從2004 年的1百萬美元猛增到2007年的2000萬美元，2008 年銷售額預(yù)計為3800萬美元。可見其市場接受程度之迅猛。
然而仔細(xì)分析Immunicon/Veridex的檢測技術(shù)，不難發(fā)現(xiàn)其顯而易見的缺陷。該技術(shù)分離檢測腫瘤細(xì)胞主要是基于腫瘤細(xì)胞表面的一種特定標(biāo)識物。但眾所周知，此腫瘤細(xì)胞表面標(biāo)識物隨著腫瘤細(xì)胞病理性生長及腫瘤細(xì)胞的入血而異常表達(dá)。而且，此一特定標(biāo)識物在細(xì)胞表面的表達(dá)量也因腫瘤不同而差異極大，包擴(kuò)高表達(dá)與不表達(dá)。所有這些使得該技術(shù)在很多情況下捕獲不到腫瘤細(xì)胞，從而限制了該技術(shù)的廣泛普及與應(yīng)用。最近臨床上已有越來越多這方面的報道。
針對Immunicon/Veridex檢測技術(shù)的致命缺點(diǎn)，我們采用了全新的思維方式，從而發(fā)明了一整套從根本上不同于Immunicon/Veridex的CTC檢測方法。其基本原理就是應(yīng)用特殊手段去除外周血中的絕大多數(shù)白細(xì)胞，從而將血中剩余的稀有細(xì)胞包括CTC進(jìn)行富集及鑒別。與Immunicon/Veridex的方法相比，我們的優(yōu)勢是明顯的：（1）大量的實(shí)驗室及臨床實(shí)驗證明我們的方法流程簡便，快捷，高效，即可用于手工操作，亦可使其自動化，能滿足人們在不同檔次的需求；（2）與Immunicon/Veridex只能局限應(yīng)用于某些腫瘤不同，我們的技術(shù)不基于腫瘤細(xì)胞表面標(biāo)識物，同一技術(shù)可提取并鑒定所有實(shí)體腫瘤的入血細(xì)胞，這一點(diǎn)已為大量實(shí)驗所證明；（3）獲取的腫瘤細(xì)胞具有很好的細(xì)胞形態(tài)，便于識別。這一點(diǎn)是Immunicon/Veridex 所不能比擬的，這也正是該公司的產(chǎn)品至今還不能為國外廣大病理科醫(yī)生所接受主要原因之一；（4）不受采血體積的限制：Immunicon/Veridex的最少工作血量為7毫升，對于很多化療病人而言這是不可行的。我們的大量臨床經(jīng)驗顯示約近1/3的腫瘤化療病人每次可采血量只有2-4 毫升，這極大限制了Immunicon/Veridex技術(shù)的廣泛應(yīng)用。然而我們的方法可適于任何體積的血樣，不存在任何最小或最大血量的限制；（5）與Immunicon/Veridex的方法相比，其只能進(jìn)行簡單的CTC計數(shù)。而我們的方法則在CTC計數(shù)的基礎(chǔ)上，還可對同一份標(biāo)本進(jìn)行其它一系列的檢查，如血清學(xué)檢查，白細(xì)胞基因組的測定，腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)，流式細(xì)胞儀分析（flowcytometry）, 原位熒光雜交（FISH）及PCR分析等；（6）除了應(yīng)用于CTC，本技術(shù)亦可用于干細(xì)胞，血管內(nèi)皮細(xì)胞及血中稀有淋巴細(xì)胞的提取與研究。
